Simoa技术

华盈视角:Simoa超灵敏蛋白质检测技术解答(FAQ)

2019/05/29

1. Simoa主要优势是什么?

①反应体系:最终免疫复合物将荧光信号锁住在50飞升小孔中,减小信号扩散和交叉反应。

比传统100μl的体系小了20亿倍,此时即使一个的目的蛋白分子催化底物可以产生足够的荧光分子被CCD成像系统进行数字化解读;

②浓度的计算是经过数字化的计算,而不是传统的ELISA的模拟算法;

③对于脑脊液、房水等的稀有样本,可稀释后进行检测,例如脑脊液可稀释100倍后检测Nfl,节约样品量。

2. Simoa每个试剂盒可以检测多少样本?

答:每个试剂盒可以做1张96孔板,其中标准品一般是S1-S8,参照品C1、C2。标准品与参照品2个重复检测,还剩76个孔。因此可检测76例样品(单孔)或38例样本(复孔)。

3. Simoa检测的标记物几倍稀释,客户需要提供多少样品?

样品需求量与客户是否做重复有关。每个标志物需要的样本体积和上样量不一样。

血清/血浆一般4-8倍稀释,提供200ul可以满足大部分标志物做2个重复,且有富余,如果客户若有需求可以将样本寄回;脑脊液要稀释100倍,大约10ul可以满足2重复检测。

4. Sioma检测的流程是什么?96孔板和光盘什么关系?

将准备好的样本加到96孔板,推入到HD-1分析仪里面,设置好参数后,分析仪会从96孔板中吸取样本,磁珠等试剂到孵育杯中(cuvette)反应。具体的,在孵育杯中,磁珠上偶联的捕获抗体与目的蛋白结合,接下来系统会洗涤磁珠以除去任何非特异性结合

的蛋白质。然后加入生物素标记的检测抗体进行孵育,再加入亲和素偶联的酶和酶反应底物。 最后将免疫复合物转移到simoa光盘(Disc)中,通过CCD成像系统进行数字化解读。因此1张96孔板需要4张光盘。

5. Simoa光盘是什么样的,为什么可以提高检测灵敏度?

Simoa TM 光盘由Sony DADC采用尖端技术制造,是Simoa HD-1分析仪的核心部件。每张光盘包含24个芯片(Array),可检测24个样本。每个芯片约有238000个微孔(well),微孔体积约为50fL。每个微孔直径4.5μm,深3.25μm,而磁珠直径2.7μm,因此每个微孔只能容纳一个磁珠。可将荧光信号锁住在50飞升小孔中,减小信号扩散和交叉反应。

6. Simoa检测技术目前应用在哪些领域?

Simoa在神经科学,肿瘤,炎症反应,感染免疫,心血管疾病,药效动力学和药代动力学等多个领域已经获得了大量成功的数据,并发表了一些列重要的文献。

· 神经疾病研究:既往只能在脑脊液中检测的神经标志物,利用 Simoa 技术可以在外周血中检测到,改变了脑损伤和神经退行性疾病的诊断方式,包括应用包括阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、外伤性脑损伤、脑震荡等。

· 肿瘤领域:在肿瘤领域,通过检出极低含量的肿瘤标志物,有助于癌症的早期诊断和预后疗效判断。

· 炎症领域:可以直接在血清或者血浆中检测常规方法检测不到的炎症和抗炎分子的含量,疾病和健康人群中炎症分子所扮演的角色将得到更进一步的研究。

· 心血管领域:超低水平检测心脏生物标志物的能力有助于心脏健康的检测。有助于早期对心脏生物标志物进行检测。

7.simoa实验的质控是什么?

质控评价有两点,1、标准曲线的CV要满足AEV%CV小于20%。表明两重复良好。由于每个标品点的浓度是试剂盒上已知的,因此标品浓度不存在CV。试剂盒有两个质控品,一个是低浓度的一个是高浓度的,质控品的浓度在说明说提供的检测范围内,表明试剂盒OK,质控过关。

8.Simoa实验做血清样本的话,个别溶血样本会影响结果么?

对于血清或血浆的样本要求是忌溶血,忌反复冻融。从我们已有经验,做过食蟹猴的血浆样本,个别轻度溶血的血浆,看上去淡粉色,可以获得实验结果,而且浓度上没有明显的异常。但是重度溶血的样本很可能在检测的时候,这个孔报错,获得不了浓度的风险。

9.Simoa实验标曲的A点的%Error为NaA是怎么回事?

每次这个点都是这样的,很正常,标曲的第一个点浓度为0,没有一个回算的浓度,分母为0,没有办法计算百分比啊。

10.Simoa试剂盒的有效期一般多久?

从试剂盒到货的有效期基本为半年以上,不到一年。