细胞因子检测

华盈视角:细胞因子检测常见问题解答(FAQ)

2019/05/29

 

1.固相芯片与液相芯片的区别?

①载体性质不同,固相芯片通过空间位置寻址来识别不同点阵元素(即区别不同的特异性反应),液相芯片则通过微球所具有的物理、光学信号(如大小或颜色)来识别点阵元素。固相芯片是在玻片表面反应,液相芯片技术在溶液中反应;

②检测通量不同:固相芯片通量高是最大特点,一次实验反应可检测指标高达上千种;液相芯片一般一次实验反应可检测几十种因子。

③样本通量不同:一张芯片固相芯片可检测2-16例,一张液相芯片检测约80例样本。

④固相芯片适合研究初期多种因子广泛筛选项目,在样本体积小,检测指标多时应用。液相芯片更适合样本数量多的多因子检测项目。


2.想做细胞因子的筛查,标本用血清还是血浆好?

血清血浆都是比较常用的样本类型,都可以用来检测细胞因子。但需要注意溶血样本可能会对细胞因子的检测结果产生一定影响。

没有一种最佳的样品制备方法明显优于所有分析物的测量。细胞因子的检测效果取决于样本收集和处理的方法以及检测技术的检测灵敏度。

参考文献:Biancotto A , Feng X , Langweiler M , et al. Effect of anticoagulants on multiplexed measurement of cytokine/chemokines in healthy subjects.[J]. Cytokine, 2012, 60(2):438-446.


3.血清可以用普通离心管收全血,4℃过夜,自然凝固分层获得,可以用液相芯片检测细胞因子吗?

血清要用专门的促凝管收集,室温(22~25℃)放置30~60 分钟,血液标本自行凝结后,用移液器吸取上层血清。促凝管内壁是处理过的,不易吸附上血细胞,而普通的管子可能会有一些血细胞附壁,对检测产生噪音。

4.样本冻存在-80℃冰箱几年,这样的标本检测细胞因子是否能检测出来呢?

样本置于-80℃保存,样本没有经过反复冻融对大多数细胞因子的检出影响不大,但是在样本中本身表达量非常低的因子会有一定的影响,建议客户拿少量几个代表性的样品先用液相芯片做预实验评估一下,再开展大规模检测。

5.ELISA试剂盒说明书中未标明适用于组织样品的检测,是否能用于检测组织样品?

组织样本本身存在多元性比较强,样本的表达差异大,无法统一,因此说明书一般没有明确的建议稀释倍数,建议客户做预实验摸索稀释倍数,或经验决定。


6.液相芯片可以定制吗?客户感兴趣的指标可以全部在一张芯片上检测吗?

市面上已经有很多Luminex液相芯片成品,包含Cytokine、Chemokine、Growth Factor、 Angiogenesis等多种功能和类型的蛋白质。同时还可以选择组合感兴趣的指标订制液相芯片,但并不是所有指标都可以放在一起检测,为了提高准确性,将不存在交叉反应的微球放在一起,形成不同panel。

对于R&D,通过官网查询是否可在同一panel中进行检测;伯乐和millipore中同一成品panle中的指标可随意搭配,但注意millipore特殊符号的含义,例如●表示仅适用于血清、血浆。


7.Luminex液相芯片检测不到的指标,可以用ELISA进行检测吗?

液相悬浮芯片的特点是需要的样品量少,同时检测的指标多,为避免微球间的交叉反应,有些指标是不能同时在一个panel中检的,这时候就需要用到ELISA进行补充,只要保证实验组和对照组用相同的方法即可。同时,ELISA也是验证luminex的一个经典技术。