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    外泌体定量蛋白质组学

    外泌体定义:

            外泌体(Exosome)是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体 )的直径30-150nm的纳米级脂质包裹体结构,密度1.13-1.21g/ml,内部包裹了蛋白质、mRNA和microRNA等物质。包括肿瘤细胞在内的几乎所有类型的细胞,都可以产生并释放外泌体。外泌体由细胞分泌释放出来,在血液等体液内传播,最后又可被其他细胞吞噬,是细胞间通讯的重要介质。

     

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    F1000 Biol Rep. 2011.PMID: 21876726



           
    外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳等,而不同组织来源的外泌体在内容物组成和功能方面存在差异,同时这种差异受到细胞外基质和微环境的动态调控。越来越多的证据表明,宿主细胞或肿瘤细胞分泌的外泌体参与了肿瘤发生、生长、侵袭和转移。对外泌体的分析和检测可以辅助疾病的早期诊断、疗效评价和预后分析。


    目前,外泌体研究主要集中在以下几个方向:

    • 开发疾病诊断和预后标志物

    • 揭示疾病发病机制

    • 作为药物载体,实现靶向给药

    • 作为疾病治疗的靶点

    • 参与免疫反应调控


    外泌体蛋白质组学服务:

     

    华盈生物根据主流外泌体研究策略,开发了一套完整的外泌体蛋白质组学研究技术服务体系。提供从外泌体收集、鉴定到蛋白质组定性定量、数据分析一系列的技术服务项目,确保外泌体研究在同样技术标准下获得高质量研究数据。

     

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    一、外泌体收集

     
           对于外泌体研究,分离和收集合格的外泌体是非常关键的一步。目前对于外泌体收集有:超速离心、密度梯度离心、超滤、磁珠免疫、聚合物沉淀与试剂盒提取法等几种主要方法,各种方法均存在不同优缺点。

     

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           华盈生物在现有试剂盒法的基础上进行大量技术优化,形成了一套针对不同样品的外泌体提取试剂盒和配套收集方法。可以在提高外泌体收集丰度的同时,显著减少杂蛋白残留,以保证蛋白质组分析阶段获得的数据更加稳定和可靠。

    华盈生物外泌体试剂盒优势:

     

      a)  外泌体结构完整;
      b)  外泌体粒径更加均一;

      c)  外泌体丰度高;
      d)  高丰度蛋白去除效果更显著;

      e)  操作简单,省时省力。

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    二、外泌体鉴定


            华盈生物可提供一整套的外泌体鉴定服务项目,包括:外泌体电镜扫描、Nanosight粒径分析、外泌体标志物Western Blot鉴定等。


    1、电镜观察

    鉴于透射电子显微镜(TEM)的工作特点,在外泌体研究中,能够直接观察到样品中外泌体的形态。并且TEM具有很高的分辨率,能够鉴别大小不一的外泌体。

    • 实验流程:外泌体制样电镜观察拍摄图片选择图片

    • 实验安排:每组拍摄一例样品

    • 实验结果:每例样本提供不少于5张电镜原始照片



    华盈生物EIQ3系列试剂盒实用效果展示:

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    2、Nanosight粒径分析

    纳米微粒追踪分析术(Nanosight)可以实时地观测外泌体粒径区间,并计算每例样品中外泌体颗粒数,为外泌体的定性和定量提供关键数据,是目前外泌体研究重点推荐的检测技术。

    • 实验流程:外泌体制样上机检测数据分析出具报告

    • 实验安排:每例样品均需进行Nanosight粒径分析

    • 实验结果:中文实验流程与数据分析报告



     

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                            NanoSight纳米颗粒测量仪

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                      单样品1000倍稀释NTA测量数据


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    、Western鉴定

    华盈生物优选了多种外泌体表面marker和抗体,如CD9(24kDa)、CD63(30-60kDa)、TSG101(45kDa)等,可提供多种外泌体常见marker的Western blot检测服务。

    实验流程:外泌体蛋白提取marker选择Western blot实验灰度图

    实验安排:每例样品均需进行Western blot鉴定分析

    实验结果:提供Western Blot灰度图


    三、外泌体蛋白质组分析


            华盈生物拥有蛋白质谱抗体芯片两种蛋白质组学检测平台,两种技术平台各具特点,优势互补,我们根据研究人员具体研究目的推荐最适合的技术平台。




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    样本要求:

     


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    四、高级生信分析

     

      
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    相关文献:

    1. Ander Arbelaiz, et al. Hepatology. 2017.

    2. Chen I H, et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2017.

    3. Haraszti R A, et al. J Extracell Vesicles, 2016.

    4. Hurwitz S N, et al. Oncotarget, 2016.

    5. Clark D J, et al. Anal Chem, 2015.

    6. Hoshino A, et al. Nature, 2015.